[ELISA] Biotin을 이용한 signal 증폭 (Biotin Signal Amplification)

Biotin은 작은 vitamin 분자입니다. 

; Biotin Molecular weight은 244.31g/mol

 

Biotin은 쉽게 modify가 가능해서 protein, antibody, biomolecular probe에 화학적으로 결합할 수 있습니다. 

 

Avidin과 Streptavidin은 protein으로 서로 다른 source에서 왔지만 두 단백질 모두 biotin과 매우 강하고 specific affinity를 가진다는 공통점이 있습니다. 

*추가로 Neutravidin은 thermo scientific 회사에서 avidin을 modify 하여 사용하는 protein입니다. 

 

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ELISA에서의 사용

 

Sivnal Amplification Methods

 

- Indirect detection의 가장 일반적인 방식은 avidin과 biotin을 이용해 signal을 증폭시키는 것입니다. 

주로 biotinylated detection antibody를 이용하는 방식인데, 이것은 HRP나 AP enzyme이 conjugation 된 avidin(streptavidin)으로 표지 됩니다. 

다른 하나는, biotinylated detection antibody를 사용하지만, 표지에 사용되는 avidin을 미리 enzyme이 conjugation된 biotin과 반응시켜 'avidin-biotin complex (ABC)'를 만든 후 표지합니다. 

 

 

	Avidin	Streptavidin	NeutrAvidin Protein  (Thermo 제품)
Molecular Weight (MW)	67 kDa	53 kDa	60 kDa
Biotin-binding sites	4	4	4
Isolectric Point (pI)	10	6.8 to 7.5	6.3
Specificity	Low	High	Highest
Affinity for Biotin (Kd)	10⁻¹⁵M	10⁻¹⁵M	10⁻¹⁵M
Nonspecific Binding	High	Low	Lowest

 

 

 

 

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[Reference]

1. SeouLin Bioscience (2018.10)

2. Nobus Bio