728x90 Experiment13 [Western blot] 항체 선정 시 고려 사항 (버퍼 및 농도) 안녕하세요 Theodora입니다. 오늘은 단백질 분석 시 많이 사용하는 western blot 실험법에 대한 내용을 다뤄볼 생각입니다. Western blot 조건 테스트, 최적화 시 가장 중요한 것은 항체입니다.항체를 희석하는 버퍼와 농도에 따라 결과가 많이 달라지게 되는데요. 항체 희석 시 비특이적 결합을 줄이기 위해 Skim milk 및 BSA를 사용하게 되는데 이때 사용되는 팁입니다.1. 1차 항체 희석 시 → BSA 추천Skim milk에는 다양한 단백질(특히 casein 등)이 포함되어 있어 항체와 비특이적 결합을 일으킬 가능성이 있음.특히 phospho-specific antibody(예: phospho-ERK, phospho-AKT 등)를 사용할 경우, milk의 성분이 signal을 방.. 2025. 6. 8. [Cloning] Cloning 실험에 사용되는 X-Gal/IPTG Solution이 뭘까? (Blue-white screen 원리) 클로닝을 하다보면, TOPO-TA cloning을 하게 될 때가 있습니다.(아무리 PCR product 증폭해서 Enzyme cut을 해도 잘 안잘리고 클로닝 효율이 감소하는 경우가 그런 예시 중에 하나라고 생각합니다.) 이 때는 Blue-white screening이 필수임에 원리를 정리하고자 하는 분들에게 설명을 드립니다. (사용한 X-gal 제품은 Thermo 사의 R0941입니다. LB plate 당 40 µL 권장하고 물론, 테스트 하시고 사용하시길 바랍니다.) Blue-White Screen이란? 1. LB agar plate에서 blue-white screening 결과Blue-white screen은 vector에 특정 DNA가 삽입된 재조합 박테리아를 빠르고 쉽게 검출하는 기법Vecto.. 2025. 5. 14. [Cell] Cell counting 하는 법 Cell을 Counting 하는 방법에 대해 알아보겠습니다. Cell counting이란 말 그대로, 세포의 수를 세는 과정입니다. 실험 시, 실험에 사용하는 cell의 수를 동일하게 함으로써 실험을 통제하기 위한 방법으로 사용합니다. 이 중, 현미경으로 직접 개수를 세는 방법에 대해 알아보겠습니다. 1. Hemocytometer 준비 70 % EtOH을 이용하여 Hemocytometer를 깨끗하게 씻습니다. Hemocytometer kit에 제공되는 Coverslip을 촉촉하게 적신 후, Hemocytometer 위에 조심히 올립니다. 이때, coverslip이 잘 깨지기 때문에 주의하여 조심합니다. 2. Cell 준비 Cell을 resuspension한 후, 10 μL를 1.5 mL tube에 옮겨 .. 2024. 4. 15. [ELISA] Biotin을 이용한 signal 증폭 (Biotin Signal Amplification) Biotin은 작은 vitamin 분자입니다. ; Biotin Molecular weight은 244.31g/mol Biotin은 쉽게 modify가 가능해서 protein, antibody, biomolecular probe에 화학적으로 결합할 수 있습니다. Avidin과 Streptavidin은 protein으로 서로 다른 source에서 왔지만 두 단백질 모두 biotin과 매우 강하고 specific affinity를 가진다는 공통점이 있습니다. *추가로 Neutravidin은 thermo scientific 회사에서 avidin을 modify 하여 사용하는 protein입니다. ELISA에서의 사용 - Indirect detection의 가장 일반적인 방식은 avidin과 biotin을 이용해 .. 2023. 7. 31. 이전 1 2 3 4 다음 728x90 반응형
