728x90 Experiment/Biochemistry Experiment8 [Cell] Cell counting 하는 법 Cell을 Counting 하는 방법에 대해 알아보겠습니다. Cell counting이란 말 그대로, 세포의 수를 세는 과정입니다. 실험 시, 실험에 사용하는 cell의 수를 동일하게 함으로써 실험을 통제하기 위한 방법으로 사용합니다. 이 중, 현미경으로 직접 개수를 세는 방법에 대해 알아보겠습니다. 1. Hemocytometer 준비 70 % EtOH을 이용하여 Hemocytometer를 깨끗하게 씻습니다. Hemocytometer kit에 제공되는 Coverslip을 촉촉하게 적신 후, Hemocytometer 위에 조심히 올립니다. 이때, coverslip이 잘 깨지기 때문에 주의하여 조심합니다. 2. Cell 준비 Cell을 resuspension한 후, 10 μL를 1.5 mL tube에 옮겨 .. 2024. 4. 15. [ELISA] Biotin을 이용한 signal 증폭 (Biotin Signal Amplification) Biotin은 작은 vitamin 분자입니다. ; Biotin Molecular weight은 244.31g/mol Biotin은 쉽게 modify가 가능해서 protein, antibody, biomolecular probe에 화학적으로 결합할 수 있습니다. Avidin과 Streptavidin은 protein으로 서로 다른 source에서 왔지만 두 단백질 모두 biotin과 매우 강하고 specific affinity를 가진다는 공통점이 있습니다. *추가로 Neutravidin은 thermo scientific 회사에서 avidin을 modify 하여 사용하는 protein입니다. ELISA에서의 사용 - Indirect detection의 가장 일반적인 방식은 avidin과 biotin을 이용해 .. 2023. 7. 31. [단백질] 단백질 연구 시 고려해야 할 사항 4편_단백질 환경 (Protein enviroment) 일반적으로 단백질의 생물학적 활성의 유지는 분자 형태의 유지에 달려있기 때문에 특히 온도 변화, 산화, 빛에 대한 노출과 같은 환경적 요인에 매우 민감합니다. 1. 온도 - 단백질은 그 특성과 실험 목적에 따라 4℃, -20℃, -80℃ 또는 액체 질소(-200℃)에 보관합니다. ; 종종 단백 용액이 얼면 변성이 초래되는데 이는 완충액이 침전되거나 부분적으로 농축되어 pH의 변화가 생겨 발생한 결과로 여겨집니다. - 일반적으로 온도가 10 ℃가 상승하면 효소 반응 속도는 거의 2배 빨라집니다. 2. 보관 - 주로 50 % Glycerol을 사용하면 단백질의 안정성을 유지할 수 있으며 냉동 보관을 해도 얼지 않습니다. ; 특히, 효소(enzyme)은 모든 단백질과 유사하게 변성에 민감하고, 높은 온도에 노.. 2023. 6. 13. [단백질] 단백질 연구 시 고려해야 할 사항 3편_세정제 (Detergent) 세포막 단백질을 분리하기 위해 단백질을 용해할 수 있는 detergent (세정제)를 사용합니다. 세포를 lysis(용해)시킬 때 사용하죠. 각 detergent는 hydrophilic head에 따라 다음과 같이 나눌 수 있습니다. Detergent Effect Ionic (이온성) Membrane을 쉽게 분산시키지만 모든 protein을 파괴하는 성질 (예: Sodium dodecyl sulfate(SDS), Lithium dodecyl sulfate(LDS)) Non-Ionic (비이온성) - 0.1% 이하의 일정 농도에서 protein 변성을 초재하지 않으므로 기능을 유지한 단백질 분리에 사용하지만 단백질 응고가 일어날 수 있음. 영향을 미치지 않으며, lipid membrane만을 파괴함. (예.. 2023. 5. 31. 이전 1 2 다음 728x90 반응형
